2022年12月發(fā)布的《中國(guó)藥典(2025 年版)編制大綱》明確提出要重點(diǎn)研究建立基于中成藥中馬兜鈴酸不得檢出的檢測(cè)方法,由此中藥中馬兜鈴酸的檢測(cè)愈發(fā)成為行業(yè)關(guān)注的焦點(diǎn)。
馬兜鈴酸主要存在于馬兜鈴科的馬兜鈴屬和細(xì)辛屬植物中,具有腎毒性、致突變及致癌性,被列為I類致癌物。其中,馬兜鈴酸A的毒性最強(qiáng)且廣泛存在于相關(guān)中藥材中。因此,建立有效的檢測(cè)方法,對(duì)加強(qiáng)含馬兜鈴酸A的中藥材及中成藥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,降低其對(duì)人體的危害有著重要作用。
檢測(cè)馬兜鈴酸的常用方法是高效液相色譜法(HPLC)和液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)法。HPLC 法通常適用于馬兜鈴酸成分含量相對(duì)高、干擾較少的中藥品種,而LC-MS/MS法具有專屬性強(qiáng)、靈敏度高、不易受干擾等優(yōu)勢(shì),是靈敏檢測(cè)中藥中馬兜鈴酸的有效方法。
取馬兜鈴中藥材,粉碎機(jī)粉碎,50目過(guò)篩兩次,精密稱取0.2g,加70%甲醇20mL,超聲提取40 min,冷卻至室溫,用70%甲醇定容至25mL,精密吸取該溶液1mL,用50%甲醇稀釋并定容至25mL,精密吸取該溶液1mL,用50%甲醇稀釋并定容至 100mL,過(guò) 0.22μm 濾膜后,上機(jī)測(cè)定。LC條件:流動(dòng)相A,1mM甲酸銨-0.05%甲酸水溶液;流動(dòng)相B,甲醇;流速,0.3mL/min;色譜柱,BEH C18(2.1x100mm,1.7μm );進(jìn)樣量 10μL;梯度,流動(dòng)相A,0-2min, 45%;6min, 20%;6.1-8min,45%。MS條件:運(yùn)行模式ESI+,毛細(xì)管高壓 4 kV,去溶劑氣流量 10.0 L/min,反吹氣流量 0.8 L/min,去溶劑氣溫度 380 ℃,碰撞氣流量 0.45 mL/min,霧化氣流量 1.2 L/min。配置 0.1 μg/L 濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣,按照 S/N=10 和 S/N=3 計(jì)算定量限和檢出限,馬兜鈴酸檢測(cè)限為 0.0044 μg/L,定量限為 0.0149 μg/L。圖1為0.1 μg/L 馬兜鈴酸A的色譜圖。選擇3個(gè)不同濃度的馬兜鈴酸A標(biāo)準(zhǔn)品,連續(xù) 6 針進(jìn)樣,考察方法穩(wěn)定性,結(jié)果見(jiàn)表1。表1 中藥馬兜鈴樣品測(cè)定結(jié)果色譜圖在中藥馬兜鈴樣品加標(biāo)濃度分別為 1 μg/L、10 μg/L、50 μg/L,每個(gè)濃度平行測(cè)定 3 次,回收率測(cè)定結(jié)果分別為 86.7%,87.8% 和 98.2%。中藥馬兜鈴樣品色譜圖和檢測(cè)結(jié)果分別見(jiàn)圖2和表2。本文使用聚光科技自主孵化子公司譜育科技的EXPEC 5210 LC-MS/MS建立了檢測(cè)中藥馬兜鈴中的馬兜鈴酸A的方法,方法檢測(cè)速度快、靈敏度高、穩(wěn)定性好,準(zhǔn)確可靠,可用于進(jìn)行中藥中馬兜鈴酸A的檢測(cè)。??